有别於以往系列作皆以红髮传奇冒险家 亚特尔（Adol）为主角的传统，本作将时空背景回溯到《伊苏》初代作 700 年前之古伊苏王国末期艾斯特利亚地方，并採双主角制，由擅长肉搏战的见习女骑士 优妮卡.托瓦（Yunika Tovah）与擅长魔法攻击的天才男魔道师 雨果.法克特（Hugo Fukt）担任主角。
故事叙述由双胞胎女神与六神官治理、藉由黑真珠之力而繁荣的传说之国伊苏，遭受突然出现的魔物军团蹂躪，并直逼王国核心的萨尔门神殿，因此女神与六神官藉由黑真珠之力将神殿漂浮到空中，避开魔物的侵略，但魔物们却建筑了通天的高塔侵袭而来。在此关键时刻，象徵伊苏的双胞胎女神却神秘失踪，於是六神官决定派遣精锐的骑士与魔道师前往魔物肆虐的地上世界，探寻女神的踪影。>
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